引言

經(jīng)過層層剝離，迷霧終將散去，光明即將到來。

我們還需要兩件工具，生化鑒定和血清學鑒定。

它們會幫我們鑒別黑白。

真相永遠只有一個！

一、純化和生化鑒定

國標流程要求從選擇分離平板上挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵、賴氨酸和營養(yǎng)瓊脂，如果三糖鐵、賴氨酸結果不能排除，那些再做其他生化。這里最大的困難是一個單菌落不夠接種三種培養(yǎng)基。而且初篩的作用有限，表中能排除的兩項，菌落在平板上都不是最典型的沙門氏菌特征。

所以我們建議第一天先純化，第二天用純化后的菌將所有生化一起做。時間上與國標一樣，都是兩天得到完整生化結果，但是菌經(jīng)過了純化，排除了選擇分離平板對生化的干擾，又獲得了大量單菌落，既能滿足生化試驗的用菌量，也能挑菌做血清。

操作順序明白后，我們再來理一下試驗思路。

國標條款5.4.2.1反應序號A1:典型反應判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。

根據(jù)上述這段話，我們理解表4所列的就是尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異常的組合，那么表4的硫化氫和靛基質應該與A1中一致。所以我們將表3和表4合并，再把表4補充完整，就可以得到下表。

我們自己做生化鑒定時，如果出現(xiàn)上表中的組合，那么就按判定結果進行補充生化試驗即可。

如果不符合上表中任何一種組合，那么直接判非沙門氏菌。

如此一來，沙門氏菌生化鑒定的思路就簡化了。

另外，表4第二行組合需要補充一些群生化，目的是看這株菌到底屬于哪個群。這里的群其實是沙門氏菌分類的亞屬。如果遇到了，補齊下表生化即可。

我們目前常見菌做生化的情況如下：

ATCC14028 鼠傷寒沙門氏菌，生化結果符合A1組合。

ATCC13076 腸炎沙門氏菌，生化結果符合A1組合。

CMCC50071 傷寒沙門氏菌，生化結果符合A1組合。

ATCC10708 豬霍亂沙門氏菌，生化結果符合A3組合，A3的補充試驗ONPG也為陰性。

ATCC12325?雙相亞利桑那，生化結果符合A1組合。

ATCC25922 大腸埃希氏菌，生化結果硫化氫與靛基質不符合A1組合，故判非沙門。

CMCC49005 奇異變形桿菌，生化結果賴氨酸與尿素不符合A1組合，故判非沙門。

從上述不同菌的生化能看出，選擇分離平板中常見的干擾菌在生化層面幾乎都被排除。大腸埃希氏菌通過硫化氫和靛基質排除；奇異變形桿菌通過賴氨酸和尿素排除。所以生化鑒定的效果還是很好的，不過依然有一些情況需要用血清學進行輔助判定。

二、血清學鑒定

關于血清學有幾點需要明確：

1、血清學在鑒定方面只是生化鑒定的輔助，血清學主要的作用在于沙門氏菌的分型。

2、血清學鑒定（主要是多價血清的鑒定）是沙門氏菌鑒定的重要部分，無論生化鑒定結果如何，血清學試驗都必須完成。

3、血清學分型在此國標中是選作項目，而且內容較為復雜，我們不做贅述。我們重點介紹多價血清的鑒定。

首先我們來認識一下沙門氏菌常見的三種抗原，O抗原、H抗原和Vi抗原。

O抗原是菌體抗原，為細胞壁脂多糖中特異性多糖部分，以阿拉伯數(shù)字順序排列。每個沙門氏菌血清型含一種或多種O抗原。基本每一個沙門氏菌都會有O抗原。

H抗原是鞭毛抗原，有鞭毛就會有動力，所以大部分沙門氏菌都有H抗原，只有雞雛沙門氏菌是沒有鞭毛的，也就沒有H抗原。H抗原分第Ⅰ相和第Ⅱ相兩種。第Ⅰ相特異性高，以a，b，c。。。。表示。第Ⅱ相特異性低，可為多種沙門氏菌共有，以1，2，3。。。。。表示。同時擁有兩個相的沙門氏菌稱雙相菌。

Vi抗原是一種表面抗原。只有少數(shù)沙門氏菌才有，比如傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌等。Vi抗原可阻止O抗原與其相應抗體的凝集反應。Vi抗原不穩(wěn)定，可通過加熱破壞。

做血清試驗時最好每步都帶上自凝試驗，即可以觀察自凝，也可以做為陰性對照（一般都不會自凝），試驗的操作流程如圖所示：

備注：

1、上述流程只涉及了多價凝集試驗，不涉及H抗原分型試驗。

2、熱處理一般建議，將菌做成濃菌液于沸水浴中煮沸15-60min，之后再進行O多價凝集試驗。

3、當H多價不凝集時應考慮菌活力是否不足，以及是否經(jīng)過了半固體平板培養(yǎng)讓鞭毛伸展。

血清學操作視頻：

O多價凝集試驗和H多價凝集試驗：

三、結果與報告

綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。

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沙門的迷霧就此破除，陽光再次照耀大地。

希望本文能對大家有幫助！